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    常用染料和試劑的配制與使用

    發(fā)布時間: 2010-04-30  點擊次數(shù): 2184次

    1. 碘-硫酸法
    植物細胞細胞壁的主要成分是纖維素,纖維素被硫酸水解后,遇碘呈藍色反應。因此用碘-硫酸法可鑒定細胞壁的成分。
    試劑配制方法:
    1% 碘液 將1.5 克碘化鉀溶于100 毫升的蒸餾水中,待*溶解后,加入1 克碘,震蕩溶解。
    66.5% 硫酸 7 份濃硫酸加入3 份蒸餾水配制而成。配制時要將濃硫酸慢慢地加入水中,并不斷地用玻璃棒攪拌,否則會因急劇發(fā)熱,而使容器炸裂。
    2. 蘇丹Ⅲ反應
    蘇丹Ⅲ可將細胞中脂肪、栓質、角質染為桔紅色,因此可用此染料顯示出上述物質在細胞中的分布和位置。
    配制方法:將蘇丹Ⅲ (或蘇丹Ⅳ)染料0.1 克,溶于10 毫升95% 酒精中,然后加入10 毫升甘油。
    3. 間苯三酚反應法
    間苯三酚反應是植物顯微化學中確定木質化細胞壁的zui常用和zui簡單的方法。這一反應的原理是當間苯三酚在酸性環(huán)境下與細胞壁中的木質素相遇時,發(fā)生櫻桃紅色或紫紅色反應。其方法是將要鑒定的切片先用一滴1mol/L 鹽酸浸透(間苯三酚要在酸性環(huán)境下才能與木質素起作用),然后滴一滴5-10% 間苯三酚的85% 酒精溶液,木質化的細胞壁即發(fā)生顏色反應。
    4.碘液測試淀粉法
    淀粉遇碘呈藍色反應,它是鑒定淀粉的zui常用方法。
    碘液配制方法:將2 克碘化鉀放入5 毫升蒸餾水中,加熱使其*溶解;然后加入1克碘,*溶解后用蒸餾水稀釋至300 毫升,放入具有毛玻璃塞的棕色玻璃瓶中,置于暗處保存。
    測定淀粉時,可將上述溶液稀釋2-10 倍,使染色不致過深,效果更好。
    5. 壓片法常用的染料
    (1) 醋酸洋紅 為壓片法中zui常用的染料。
    配制方法是:先將100 毫升45% 醋酸水溶液放于燒瓶中煮沸,移去火焰,停止加熱。然后緩慢加入1 克洋紅粉末,全部加入后再煮沸1-2 分鐘。此時可將一枚生銹鐵釘用棉線懸入溶液中約1 分鐘后取出(鐵為媒染劑)。靜置12 小時后經(jīng)過過濾,放入磨口玻璃塞棕色瓶中保存?zhèn)溆谩?br />(2) 石炭酸---品紅 為近年創(chuàng)用的一種優(yōu)良核染色劑,將細胞核和染色體染為紅紫色,細胞質一般不著色,背景清晰。
    其配制方法有二:
    配方Ⅰ:
    原液A:取3 克堿性品紅溶于100 毫升的70%酒精中(此液體可長期保存)。
    原液B:取10 毫升原液A,加入90 毫升5% 的石炭酸(酚)水溶液中(可保存兩周)。
    染色液:取55 毫升原液B 加6 毫升冰醋酸和6 毫升37% 甲醛。
    此染色液因含有較多的甲醛,可使原生質體硬化,而能保持其固有的形態(tài)。但也因此不易使組織軟化,因而不太適用于植物組織的染色體壓片染色(本染色液適于植物原生質體培養(yǎng)中使用)。在此基礎上加以改進的配方Ⅱ,則可普遍地用于一般植物組織的染色體壓片的染色。
    配方Ⅱ:
    取配方Ⅰ中的染色液20 毫或加80 毫升45% 醋酸和1.8 克山梨醇。
    染色液配制后為淡品紅色,如立即使用染色較淺。放置2 周后,染色能力顯著增強,而且放置時間越久,染色效果越好。
    6.鉻酸-硝酸離析法
    為了觀察一個細胞完整的立體形態(tài)結構,可以用一些化學藥品把細壁中的中層物質(果膠質)溶解,使細胞分離散開,便于觀察。
    離析前先把材料洗凈,用刀切成1-2 毫米寬的狹條(如葉片)或切成火柴棍粗細的長約1 厘米的小條(如根或莖)。然后把切好的材料放進小玻璃瓶中,加入離析液(加入量約為材料的20 倍),塞緊瓶塞,放于30-40℃ 溫箱中。浸漬時間因材料性質而異,葉片和幼嫩的根莖組織3-4 小時即可,而有些次生結構(如木質部)則需要更長的時間。離析情況應隨時檢查,檢查的方法是取少許離析材料,放在載玻片上,加一滴水,蓋上蓋玻片,然后用解剖針輕輕敲打,如果材料分離則表明浸漬時間已夠。浸漬時間超過一天以上時,應更換離
    析液一次。離析時間已夠的材料,用水洗凈后放入70% 酒精中保存。
    離析液配方:
    10% 鉻酸 1份
    10%硝酸 1 份
    兩種溶液應在使用時才混合,混合均勻后再使用。

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